ΑΡΧΑΙΑ ΙΘΩΜΗ

Έχει και συνέχεια!

Η  ΑΡΧΑΙΑ ΙΘΩΜΗ ΑΠΟ ΤΗΝ ΑΡΧΗ  σας έλεγε ότι είναι κατασκευασμένο βιολογικό όπλο, η πατέντα καταγράφηκε το 2010!!!!!!!!!!

Η έρευνα που έχω κάνει με κόπο κράτησε πάνω από μήνα! Είναι από διάφορες πηγές. Τα στοιχεία είναι τρομερά και δεν μπορούν να τα διαψεύσουν,!!!!

Το θέμα και τα στοιχεία είναι μεγάλο και για αυτό θα σας το ανεβάζω λίγο λίγο!

Πρωτοβάθμιος εξεταστής: Calamita; Heather G
Δικηγόρος, πράκτορας ή εταιρεία: Finnegan, Henderson, Farabow, Garrett & Dunner, LLP

Αξιώσεις
Η εφεύρεση που αξιώνεται είναι:

1. Ένα απομονωμένο ή καθαρισμένο στέλεχος ανθρώπινου κορανοϊού που σχετίζεται με σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο, χαρακτηριζόμενο από το ότι το γονιδίωμά του έχει, υπό τη μορφή συμπληρωματικού DNA, ένα κωδικόνιο σερίνης στη θέση 23220-23222 του γονιδίου για το S πρωτεΐνη ή κωδικόνιο γλυκίνης στη θέση 25298-25300 του γονιδίου για το ORF3, και ένα κωδικόνιο αλανίνης στη θέση 7918-7920 του ORF1a ή ένα κωδικόνιο σερίνης στη θέση 26857-26859 του γονιδίου για την πρωτεΐνη Μ, με τις εν λόγω θέσεις να υποδεικνύονται με όρους αναφοράς στην ακολουθία Genbank AY274119.3.

2. Το απομονωμένο ή καθαρισμένο στέλεχος κορανοϊού όπως αξιώνεται στην αξίωση 1, χαρακτηριζόμενο από το ότι το ισοδύναμο DNA του γονιδιώματός του έχει μια αλληλουχία που αντιστοιχεί στην αλληλουχία SEQ ID ΝΟ: 1.

3. Ένα απομονωμένο ή καθαρισμένο πολυνουκλεοτίδιο, που χαρακτηρίζεται από το ότι η αλληλουχία του είναι εκείνη του γονιδιώματος του απομονωμένου στελέχους κορανοϊού όπως αξιώνεται στην αξίωση 1 ή αξίωση 2.

4. Το απομονωμένο ή καθαρισμένο πολυνουκλεοτίδιο όπως αξιώνεται στην αξίωση 3, χαρακτηριζόμενο από το ότι η αλληλουχία του είναι SEQ ID ΝΟ: 1.

5. Ένα θραύσμα του πολυνουκλεοτιδίου όπως αξιώνεται στην αξίωση 3, χαρακτηριζόμενο από το ότι περιλαμβάνει τουλάχιστον ένα ζεύγος βάσεων ή ζεύγη βάσεων που αντιστοιχούν στις ακόλουθες θέσεις: 7919 και 23220, 7919 και 25298, 16622 και 23220, 19064 και 23220, 16622 και 25298, 19064 και 25298, 23220 και 24872, 23220 και 26857, 24872 και 25298, 25298 και 26857.

Περιγραφή

Η παρούσα εφεύρεση αναφέρεται σε ένα νέο στέλεχος στενού οξέος αναπνευστικού συνδρόμου (SARS) που σχετίζεται με κοροναϊό που προέρχεται από ένα δείγμα που καταγράφεται υπό τον αριθμό 031589 και συλλέχθηκε στο Ανόι (Βιετνάμ), σε μόρια νουκλεϊκών οξέων που προέρχονται από το γονιδίωμά του, στις πρωτεΐνες και τα πεπτίδια κωδικοποιούνται από τα εν λόγω μόρια νουκλεϊνικού οξέος και στις εφαρμογές τους, ιδίως ως διαγνωστικά αντιδραστήρια και / ή ως εμβόλιο.

Ο κοροναϊός είναι ένας ιός που περιέχει μονόκλωνο RNA, θετικής πολικότητας, περίπου 30 kilobases που αντιγράφεται στο κυτόπλασμα των κυττάρων ξενιστών. το άκρο 5 ‘του γονιδιώματος έχει δομή με ανώτατο όριο και το άκρο 3’ περιέχει ουρά polyA. Αυτός ο ιός περιβάλλεται και περιλαμβάνει, στην επιφάνειά του, πεπλομερείς δομές που ονομάζονται spicules.

Το γονιδίωμα περιλαμβάνει τα ακόλουθα ανοιχτά πλαίσια ανάγνωσης ή ORF, από το άκρο 5 ‘έως το άκρο 3’: ORF1a και ORF1b που αντιστοιχούν στις πρωτεΐνες του συμπλόκου αντιγραφής-αντιγραφής και ORF-S, ORF-E, ORF-M και ORF -Ν που αντιστοιχεί στις δομικές πρωτεΐνες S, E, M και N. Περιλαμβάνει επίσης ORF που αντιστοιχούν σε πρωτεΐνες άγνωστης λειτουργίας που κωδικοποιούνται από: την περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF-S και ORF-E και αλληλεπικαλυπτόμενη με την τελευταία, την περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF- M και ORF-N, και η περιοχή περιλαμβάνεται στο ORF-N.

Η πρωτεΐνη S είναι μια γλυκοπρωτεΐνη μεμβράνης (200-220 kDa) η οποία υπάρχει με τη μορφή καρφιών ή ακίδων που αναδύονται από την επιφάνεια του ιικού περιβλήματος. Είναι υπεύθυνη για την προσκόλληση του ιού στους υποδοχείς του κυττάρου ξενιστή και για την πρόκληση της σύντηξης του ιικού περιβλήματος με την κυτταρική μεμβράνη.

Η μικρή πρωτεΐνη φακέλου (Ε), που ονομάζεται επίσης sM (μικρή μεμβράνη), η οποία είναι μια μη γλυκοζυλιωμένη διαμεμβρανική πρωτεΐνη περίπου 10 kDa, είναι η πρωτεΐνη που υπάρχει στη μικρότερη ποσότητα στο βιριόν. Παίζει ισχυρό ρόλο στη διαδικασία εκκόλαψης κορανοϊού που συμβαίνει στο επίπεδο του ενδιάμεσου διαμερίσματος στο ενδοπλασματικό δίκτυο και στη συσκευή Golgi.

Η πρωτεΐνη Μ ή η πρωτεΐνη μήτρας (25-30 kDa) είναι μια πιο άφθονη γλυκοπρωτεΐνη μεμβράνης η οποία ενσωματώνεται στο ιικό σωματίδιο μέσω αλληλεπίδρασης Μ / Ε, ενώ η ενσωμάτωση του S στα σωματίδια κατευθύνεται από αλληλεπίδραση S / M. Φαίνεται να είναι σημαντικό για την ωρίμανση του ιού των κοροναϊών και για τον προσδιορισμό της θέσης όπου συναρμολογούνται τα ιικά σωματίδια.

Η πρωτεΐνη Ν ή η πρωτεΐνη νουκλεοκαψιδίου (45-50 kDa) που είναι η πιο συντηρημένη μεταξύ των δομικών πρωτεϊνών του κοροναϊού είναι απαραίτητη για την ενκαψιδίωση του γονιδιωματικού RNA και στη συνέχεια για την καθοδήγηση της ενσωμάτωσής του στο βιριόν. Αυτή η πρωτεΐνη πιθανότατα εμπλέκεται και στην αντιγραφή του RNA.

Όταν το κύτταρο ξενιστής μολυνθεί, το πλαίσιο ανάγνωσης (ORF) που βρίσκεται στο 5 ‘του ιικού γονιδιώματος μεταφράζεται σε μια πολυπρωτεΐνη η οποία διασπάται από τις ιικές πρωτεάσες και στη συνέχεια απελευθερώνει πολλές μη δομικές πρωτεΐνες όπως η RNA-εξαρτώμενη RNA πολυμεράση (Rep) και η ελικάση ATPase (Hel). Αυτές οι δύο πρωτεΐνες εμπλέκονται στον αναδιπλασιασμό του ιικού γονιδιώματος και στη δημιουργία μεταγραφών που χρησιμοποιούνται στη σύνθεση των ιικών πρωτεϊνών. Οι μηχανισμοί με τους οποίους παράγονται αυτά τα υπογονιδιωματικά mRNA δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Ωστόσο, πρόσφατα γεγονότα δείχνουν ότι οι αλληλουχίες για ρύθμιση της μεταγραφής στο 5 ‘άκρο κάθε γονιδίου αντιπροσωπεύουν σήματα που ρυθμίζουν την ασυνεχή μεταγραφή των υπογονιδιωματικών mRNA.

Οι πρωτεΐνες της ιικής μεμβράνης (S, Ε και Μ πρωτεΐνες) εισάγονται στο ενδιάμεσο διαμέρισμα, ενώ το αντιγραφόμενο RNA (+ κλώνος) συναρμολογείται με την Ν (νουκλεοκαψίδιο) πρωτεΐνη. Αυτό το σύμπλοκο πρωτεΐνης-RNA στη συνέχεια συνδυάζεται με την πρωτεΐνη Μ που περιέχεται στις μεμβράνες του ενδοπλασμικού δικτύου και τα ιικά σωματίδια σχηματίζονται όταν το σύμπλοκο νουκλεοκαψιδίου βυθίζεται στο ενδοπλασματικό δίκτυο. Ο ιός στη συνέχεια μεταναστεύει στο σύμπλεγμα Golgi και τελικά φεύγει από το κύτταρο, για παράδειγμα με εξωκυττάρωση. Η θέση σύνδεσης του ιού στο κύτταρο ξενιστή βρίσκεται στο επίπεδο της πρωτεΐνης S.

Οι κοροναϊοί ευθύνονται για το 15 έως 30% του κρυολογήματος στον άνθρωπο και για αναπνευστικές και πεπτικές λοιμώξεις σε ζώα, ειδικά γάτες (FIPV: ιός μολυσματικής περιτονίτιδας αιλουροειδών), πουλερικά (IBV: ιός μολυσματικής βρογχίτιδας των πτηνών), ποντίκια (MHV: ιός ηπατίτιδας ποντικού) , χοίροι (TGEV: Μεταδοτικός ιός γαστρεντερίτιδας, PEDV: Ιός επιδημίας διάρροιας χοίρου, PRCoV: Ιός εγκεφαλομυελίτιδας του αναπνευστικού χοίρου) και βοοειδή (BCoV: κοροϊός βοοειδών).

Γενικά, κάθε κοροϊός επηρεάζει μόνο ένα είδος. Σε ανοσοεπάρκεια ατόμων, η μόλυνση προκαλεί προαιρετικά εξουδετερωτικά αντισώματα και κυτταρική ανοσία, ικανά να καταστρέψουν τα μολυσμένα κύτταρα.

Μια επιδημία άτυπης πνευμονίας, που ονομάζεται σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο (SARS) έχει εξαπλωθεί σε διάφορες χώρες (Βιετνάμ, Χονγκ Κονγκ, Σιγκαπούρη, Ταϊλάνδη και Καναδάς) κατά το πρώτο τρίμηνο του 2003, από μια αρχική εστίαση που εμφανίστηκε στην Κίνα το τελευταίο τρίμηνο του 2002. Η σοβαρότητα αυτής της ασθένειας είναι τέτοια που το ποσοστό θνησιμότητάς του είναι περίπου 3 έως 6%. Ο προσδιορισμός του αιτιολογικού παράγοντα αυτής της ασθένειας βρίσκεται σε εξέλιξη από πολλά εργαστήρια παγκοσμίως.

Τον Μάρτιο του 2003, απομονώθηκε ένας νέος κοροϊός (SARS-CoV ή SARS), σε συνδυασμό με περιπτώσεις σοβαρού οξέος αναπνευστικού συνδρόμου (TG KSIAZEK et al., The New England Journal of Medicine, 2003, 348, 1319-1330 DROSTEN et al., The New England Journal of Medicine, 2003, 348, 1967-1976, Peiris et al., Lancet, 2003, 361, 1319).

Έτσι έχουν ληφθεί γονιδιωματικές αλληλουχίες αυτού του νέου κοροναϊού, ιδίως εκείνες του απομονωμένου Urbani (Genbank accession No. απομόνωση (Tor2, Genbank accession Νο. AY278741 and A. ROTA et al., Science, 2003, 300, 1394-1399).

Η οργάνωση του γονιδιώματος είναι συγκρίσιμη με αυτή άλλων γνωστών κοροναϊών, καθιστώντας έτσι δυνατή την επιβεβαίωση ότι το SARS-CoV ανήκει στην οικογένεια Coronaviridae. ανοιχτά πλαίσια ανάγνωσης ORF1a και 1b και ανοιχτά πλαίσια ανάγνωσης που αντιστοιχούν στις πρωτεΐνες S, E, M και N, και σε πρωτεΐνες που κωδικοποιούνται από: την περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF-S και ORF-E (ORF3), η περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF-S και ORF-E και αλληλεπικαλυπτόμενο ORF-E (ORF4), η περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF-M και ORF-N (ORF7 έως ORF11) και η περιοχή που αντιστοιχεί στο ORF-N (ORF13 και ORF14), έχουν αναγνωριστεί συγκεκριμένα.

Έχουν εντοπιστεί επτά διαφορές μεταξύ των αλληλουχιών των απομονωμένων Tor2 και Urbani. 3 αντιστοιχούν σε σιωπηλές μεταλλάξεις (c / t στη θέση 16622 και a / g στη θέση 19064 του ORF1b, t / c στη θέση 24872 του ORF-S) και 4 τροποποιούν την αλληλουχία αμινοξέων αντίστοιχα: τις πρωτεΐνες που κωδικοποιούνται από το ORF1a (c / t στη θέση 7919 που αντιστοιχεί στη μετάλλαξη A / V), η S πρωτεΐνη (g / t στη θέση 23220 που αντιστοιχεί στη μετάλλαξη A / S), η πρωτεΐνη που κωδικοποιείται από το ORF3 (a / g στη θέση 25298 που αντιστοιχεί στο R / Μετάλλαξη G) και η πρωτεΐνη Μ (t / c στη θέση 26857 που αντιστοιχεί στη μετάλλαξη S / P).

Επιπλέον, η φυλογενετική ανάλυση δείχνει ότι το SARS-CoV είναι μακρινό από άλλους κοροναϊούς και ότι δεν εμφανίστηκε με μετάλλαξη ανθρώπινων αναπνευστικών κοροναϊών ούτε με ανασυνδυασμό μεταξύ γνωστών κοροναϊών (για μια ανασκόπηση, βλ. Holmes, JCI, 2003, 111, 1605-1609 ).

Ο προσδιορισμός και η συνεκτίμηση νέων παραλλαγών είναι σημαντικοί για την ανάπτυξη αντιδραστηρίων για την ανίχνευση και διάγνωση του SARS τα οποία είναι επαρκώς ευαίσθητα και ειδικά, και ανοσογονικές συνθέσεις ικανές να προστατεύουν τους πληθυσμούς από επιδημίες του SARS.

Οι εφευρέτες έχουν πλέον εντοπίσει ένα άλλο στέλεχος του κοροναϊού που σχετίζεται με το SARS, το οποίο διακρίνεται από τα προϊόντα απομόνωσης Tor2 και Urbani.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι συνεπώς ένα απομονωμένο ή καθαρισμένο στέλεχος ανθρώπινου κοροναϊού που σχετίζεται με σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο, χαρακτηριζόμενο από το ότι το γονιδίωμά του έχει, με τη μορφή συμπληρωματικού DNA, ένα κωδικόνιο σερίνης στη θέση 23220-23222 του γονιδίου για Πρωτεΐνη S ή κωδικόνιο γλυκίνης στη θέση 25298-25300 του γονιδίου για ORF3, και κωδικόνιο αλανίνης στη θέση 7918-7920 του ORF1a ή κωδικόνιο σερίνης στη θέση 26857-26859 του γονιδίου για την πρωτεΐνη Μ, με τις εν λόγω θέσεις να αναφέρονται όροι αναφοράς στην ακολουθία Genbank AY274119.3.

Σύμφωνα με μια πλεονεκτική υλοποίηση του εν λόγω στελέχους, το ισοδύναμο DNA του γονιδιώματός του έχει μια αλληλουχία που αντιστοιχεί στην αλληλουχία SEQ ID Νο: 1. Αυτό το στέλεχος κορανοϊού προέρχεται από το δείγμα που συλλέχθηκε από τις βρογχοκυψελιδικές πλύσεις από έναν ασθενή που πάσχει από SARS, που καταγράφηκε με τον υπ ‘αριθμ.

Σύμφωνα με την εφεύρεση, η εν λόγω αλληλουχία SEQ Ιϋ Νο: 1 είναι αυτή του δεοξυριβονουκλεϊκού οξέος που αντιστοιχεί στο μόριο ριβονουκλεϊκού οξέος του γονιδιώματος του απομονωμένου στελέχους κοροναϊού όπως ορίζεται παραπάνω.

Η ακολουθία SEQ ID No: 1 διακρίνεται από την ακολουθία Genbank AY274119.3 (Tor2 isolate) στο ότι διαθέτει τις ακόλουθες μεταλλάξεις: g / t στη θέση 23220; Το κωδικόνιο αλανίνης (gct) στη θέση 577 της αλληλουχίας αμινοξέων της πρωτεΐνης Tor2S αντικαθίσταται από ένα κωδικόνιο σερίνης (tct), a / g στη θέση 25298 · το κωδικόνιο αργινίνης (aga) στη θέση 11 της αλληλουχίας αμινοξέων της πρωτεΐνης που κωδικοποιείται από το Tor2 ORF3 αντικαθίσταται από ένα κωδικόνιο γλυκίνης (gga).

Επιπλέον, η αλληλουχία SEQ ID No: 1 διακρίνεται από την ακολουθία Genbank AY278741 (Urbani isolate) στο ότι διαθέτει τις ακόλουθες μεταλλάξεις: t / c στη θέση 7919; το κωδικόνιο βαλίνης (gtt) στη θέση 2552 της αλληλουχίας αμινοξέων της πρωτεΐνης που κωδικοποιείται από το ORF1a αντικαθίσταται από ένα κωδικόνιο αλανίνης (gct), t / c στη θέση 16622: αυτή η μετάλλαξη δεν τροποποιεί την αλληλουχία αμινοξέων των κωδικοποιημένων πρωτεϊνών από ORF1b (σιωπηλή μετάλλαξη), g / a στη θέση 19064: αυτή η μετάλλαξη δεν τροποποιεί την αλληλουχία αμινοξέων των πρωτεϊνών που κωδικοποιούνται από ORF1b (σιωπηλή μετάλλαξη), c / t στη θέση 24872: αυτή η μετάλλαξη δεν τροποποιεί την αλληλουχία αμινοξέων της πρωτεΐνης S, και c / t στη θέση 26857: το κωδικόνιο προλίνης (ccc) στη θέση 154 της αλληλουχίας αμινοξέων της πρωτεΐνης Μ αντικαθίσταται από ένα κωδικόνιο σερίνης (tcc).

Εκτός εάν δηλώνεται διαφορετικά, οι θέσεις των αλληλουχιών νουκλεοτιδίων και πεπτιδίων υποδεικνύονται με αναφορά στην αλληλουχία Genbank ΑΥ274119.3.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα απομονωμένο ή καθαρισμένο πολυνουκλεοτίδιο, που χαρακτηρίζεται από το ότι η αλληλουχία του είναι αυτή του γονιδιώματος του απομονωμένου στελέχους κοροναϊού όπως ορίζεται παραπάνω.

Σύμφωνα με μια πλεονεκτική πραγματοποίηση του εν λόγω πολυνουκλεοτιδίου, έχει την αλληλουχία SEQ ID Νο. 1.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα απομονωμένο ή καθαρισμένο πολυνουκλεοτίδιο, που χαρακτηρίζεται από το ότι η αλληλουχία του υβριδοποιείται υπό συνθήκες υψηλής αυστηρότητας με την αλληλουχία του πολυνουκλεοτιδίου ως ορίζεται παραπάνω.

Οι όροι “απομονωμένο ή καθαρισμένο” σημαίνει τροποποιημένο “από το χέρι των ανθρώπων” από τη φυσική κατάσταση. Με άλλα λόγια εάν ένα αντικείμενο υπάρχει στη φύση, λέγεται ότι είναι απομονωμένο ή καθαρισμένο εάν τροποποιηθεί ή εξαχθεί από το φυσικό του περιβάλλον ή και τα δύο. Για παράδειγμα, ένα πολυνουκλεοτίδιο ή μια πρωτεΐνη / πεπτίδιο που υπάρχει φυσικά σε έναν ζωντανό οργανισμό δεν απομονώνεται ούτε καθαρίζεται. από την άλλη πλευρά, το ίδιο πολυνουκλεοτίδιο ή πρωτεΐνη / πεπτίδιο που διαχωρίζεται από τα συνυπάρχοντα μόρια στο φυσικό του περιβάλλον, που λαμβάνεται με κλωνοποίηση, ενίσχυση και / ή χημική σύνθεση, απομονώνεται για τους σκοπούς της παρούσας εφεύρεσης. Περαιτέρω, ένα πολυνουκλεοτίδιο ή μια πρωτεΐνη / πεπτίδιο που εισάγεται σε έναν οργανισμό με μετασχηματισμό, γενετικό χειρισμό ή με οποιαδήποτε άλλη μέθοδο, “απομονώνεται” ακόμη και αν υπάρχει στον εν λόγω οργανισμό.

Για τους σκοπούς της παρούσας εφεύρεσης, οι συνθήκες υβριδισμού υψηλής αυστηρότητας νοούνται ως συνθήκες θερμοκρασίας και ιοντικής ισχύος που επιλέγονται έτσι ώστε να καθιστούν δυνατή τη διατήρηση του ειδικού και επιλεκτικού υβριδισμού μεταξύ συμπληρωματικών πολυνουκλεοτιδίων.

Ενδεικτικά, οι συνθήκες υψηλής αυστηρότητας για τους σκοπούς του ορισμού των παραπάνω πολυνουκλεοτιδίων είναι πλεονεκτικά οι ακόλουθες: ο υβριδισμός DNA-DNA ή DNA-RNA πραγματοποιείται σε δύο στάδια: (1) προ-υβριδισμός στα 42 ° C. Γ. Για 3 ώρες σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (20 mM, ρΗ 7,5) που περιέχει 5 φορές. SSC (1 φορές. Το SSC αντιστοιχεί σε 0,15 Μ NaCl + 0,015 Μ διάλυμα κιτρικού νατρίου), 50% φορμαμίδιο, 7% δωδεκυλ θειικό νάτριο (SDS), 10. ώρες. Denhardt’s, 5% θειική δεξτράνη και 1% DNA σπέρματος σολομού. (2) υβριδισμός για 20 ώρες στους 42 βαθμούς. Γ. Ακολουθούμενο από 2 πλύσεις των 20 λεπτών στους 20 ° C. Γ. Σε 2 ώρες. SSC + 2% SDS, 1 πλύσιμο 20 λεπτών στους 20 ° C. Γ. Σε 0.1. χρόνους. SSC + 0.1% SDS. Το τελικό πλύσιμο πραγματοποιείται σε 0.1. χρόνους. SSC + 0.1% SDS για 30 λεπτά στους 60. βαθμούς. ΝΤΟ.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα αντιπροσωπευτικό θραύσμα του πολυνουκλεοτιδίου όπως ορίζεται παραπάνω, χαρακτηριζόμενο από το ότι μπορεί να ληφθεί είτε με τη χρήση ενζύμων περιορισμού των οποίων οι θέσεις αναγνώρισης και διάσπασης υπάρχουν στο εν λόγω πολυνουκλεοτίδιο όπως ορίζεται παραπάνω, ή από ενίσχυση με τη βοήθεια ολιγονουκλεοτιδικών εκκινητών ειδικών για το εν λόγω πολυνουκλεοτίδιο όπως ορίζεται παραπάνω, ή με μεταγραφή in vitro, ή με χημική σύνθεση.

Σύμφωνα με μια πλεονεκτική πραγματοποίηση του εν λόγω θραύσματος, επιλέγεται από την ομάδα που αποτελείται από: το cDNA που αντιστοιχεί σε τουλάχιστον ένα ανοιχτό πλαίσιο ανάγνωσης (ORF) που επιλέγεται από: ORF1a, ORF1b, ORF-S, ORF-E, ORF-M, ORF-N, ORF3, ORF4, ORF7 έως ORF11, ORF13 και ORF14 και το cDNA που αντιστοιχεί στα μη κωδικοποιούμενα 5 ‘ή 3’ άκρα του εν λόγω πολυνουκλεοτιδίου.

Σύμφωνα με ένα πλεονεκτικό χαρακτηριστικό αυτής της υλοποίησης, το εν λόγω θραύσμα έχει μια αλληλουχία που επιλέγεται από την ομάδα που αποτελείται από: τις αλληλουχίες SEQ ID ΝΟ: 2 και 4 που αντιπροσωπεύουν το cDNA που αντιστοιχεί στο ORF-S που κωδικοποιεί την S πρωτεΐνη, τις αλληλουχίες SEQ ID ΝΟ. : 13 και 15 που αντιπροσωπεύουν το cDNA που αντιστοιχεί στο ORF-E που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη Ε, οι αλληλουχίες SEQ ID ΝΟ: 16 και 18 αντιπροσωπεύουν το cDNA που αντιστοιχεί στο ORF-M που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη Μ, οι αλληλουχίες SEQ ID ΝΟ: 36 και 38 που αντιπροσωπεύουν το cDNA που αντιστοιχεί στο ORF-N που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη Ν, οι αλληλουχίες που αντιπροσωπεύουν το cDNA αντιστοιχούν αντίστοιχα: στα ORF1a και ORF1b (ORF1ab, SEQ ID ΝΟ: 31), στα ORF3 και ORF4 (SEQ ID ΝΟ: 7, 8), στο ORF7 έως 11 (SEQ ID ΝΟ: 19, 20) στο ORF13 (SEQ ID NO: 32) και στο ORF14 (SEQ ID NO: 34),και οι αλληλουχίες που αντιπροσωπεύουν τα cDNA που αντιστοιχούν αντίστοιχα στα άκρα 5 ‘(SEQ ID ΝΟ: 39 και 72) και 3’ (SEQ ID ΝΟ: 40, 73) του εν λόγω πολυνουκλεοτιδίου.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα θραύσμα cDNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη S, όπως ορίζεται παραπάνω, που χαρακτηρίζεται από το ότι έχει μια αλληλουχία που επιλέγεται από την ομάδα που αποτελείται από τις αλληλουχίες SEQ ID ΝΟ: 5 και 6 (θραύσματα Sa και Sb).

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα θραύσμα cDNA που αντιστοιχεί στα ORF1a και ORF1b όπως ορίζεται παραπάνω, χαρακτηριζόμενο από το ότι έχει μια αλληλουχία που επιλέγεται από την ομάδα που αποτελείται από τις αλληλουχίες SEQ ID ΝΟ: 41 έως 54 (θραύσματα L0 έως L12).

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα θραύσμα πολυνουκλεοτιδίου όπως ορίζεται παραπάνω, χαρακτηριζόμενο από το ότι έχει τουλάχιστον 15 διαδοχικές βάσεις ή ζεύγη βάσεων της αλληλουχίας του γονιδιώματος του εν λόγω στελέχους που περιλαμβάνει τουλάχιστον ένα από αυτά που βρίσκονται στη θέση 7979, 16622, 19064, 23220, 24872, 25298 και 26857. Κατά προτίμηση αυτό είναι ένα θραύσμα από 20 έως 2500 βάσεις ή ζεύγη βάσεων, κατά προτίμηση από 20 έως 400.

Σύμφωνα με μια πλεονεκτική εφαρμογή του εν λόγω θραύσματος, περιλαμβάνει τουλάχιστον ένα ζεύγος βάσεων ή ζευγών βάσεων που αντιστοιχεί στις ακόλουθες θέσεις: 7919 και 23220, 7919 και 25298, 16622 και 23220, 19064 και 23220, 16622 και 25298, 19064 και 25298, 23220 και 24872, 23220 και 26857, 24872 και 25298, 25298 και 26857.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης εκκινητές τουλάχιστον 18 βάσεων ικανών να ενισχύσουν ένα θραύσμα του γονιδιώματος ενός σχετιζόμενου με SARS κοροναϊού ή του ισοδύναμου DNA αυτού.

Σύμφωνα με μια πραγματοποίηση των εν λόγω εκκινητών, επιλέγονται από την ομάδα που αποτελείται από: το ζεύγος εκκινητών Νο. 1 που αντιστοιχεί αντίστοιχα στις θέσεις 28507 έως 28522 (νοηματικό αστάρι, SEQ Ιϋ ΝΟ: 60) και 28774 έως 28759 (αντιπληροφοριακός εκκινητής, SEQ ID ΝΟ: 61) της αλληλουχίας του πολυνουκλεοτιδίου όπως ορίστηκε παραπάνω, το ζεύγος εκκινητών Νο. 2 αντιστοιχεί αντίστοιχα στις θέσεις 28375 έως 28390 (λογικός εκκινητής, SEQ ID ΝΟ: 62) και 28702 έως 28687 (αντιπληροφοριακός εκκινητής, SEQ ID ΝΟ. : 63) της αλληλουχίας του πολυνουκλεοτιδίου όπως ορίζεται παραπάνω, και του ζεύγους εκκινητών που αποτελούνται από τους εκκινητές SEQ ID Νο. 55 και 56.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένας ανιχνευτής ικανός να ανιχνεύει την παρουσία του γονιδιώματος ενός ιούς που σχετίζεται με SARS ή ενός θραύσματος αυτού, που χαρακτηρίζεται από το ότι επιλέγεται από την ομάδα που αποτελείται από: τα θραύσματα όπως ορίζονται παραπάνω και τα θραύσματα που αντιστοιχεί στις ακόλουθες θέσεις της αλληλουχίας πολυνουκλεοτιδίων όπως ορίζεται παραπάνω: 28561 έως 28586, 28588 έως 28608, 28541 έως 28563 και 28565 έως 28589 (SEQ ID ΝΟ: 64 έως 67).

Οι ανιχνευτές και οι εκκινητές σύμφωνα με την εφεύρεση μπορούν να επισημανθούν άμεσα ή έμμεσα με μια ραδιενεργή ή μη ραδιενεργή ένωση με μεθόδους πασίγνωστες στους ειδικούς του επαγγέλματος έτσι ώστε να ληφθεί ένα ανιχνεύσιμο και / ή ποσοτικό σήμα. Μεταξύ των ραδιενεργών ισοτόπων που χρησιμοποιούνται, μπορεί να αναφερθούν .sup.32P, .sup.33P, .sup.35S, .sup.3H ή .sup.125I. Οι μη ραδιενεργές οντότητες επιλέγονται από συνδετήρες όπως βιοτίνη, αβιδίνη, στρεπταβιδίνη, διγοξυγενίνη, απτίνες, βαφές, φωταυγή παράγοντες όπως ραδιοφωταύγεια, χημειοφωταύγεια, βιοφωταύγεια, φθορίζοντα και φωσφορίζοντα μέσα.

Η εφεύρεση περιλαμβάνει τους επισημασμένους ανιχνευτές και εκκινητές που προέρχονται από τις προηγούμενες αλληλουχίες.

Τέτοιοι ανιχνευτές και εκκινητές είναι χρήσιμοι για τη διάγνωση λοίμωξης από έναν κοροναϊό που σχετίζεται με SARS.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης μια μέθοδος για την ανίχνευση ενός κοροναϊού που σχετίζεται με SARS, από ένα βιολογικό δείγμα, η οποία μέθοδος χαρακτηρίζεται από το ότι περιλαμβάνει τουλάχιστον: (α) την εκχύλιση νουκλεϊκών οξέων που υπάρχουν στο εν λόγω βιολογικό δείγμα, (β) την ενίσχυση ενός θραύσματος ORF-N με RT-PCR με τη βοήθεια ενός ζεύγους εκκινητών όπως ορίζεται παραπάνω, και (γ) την ανίχνευση, με οποιοδήποτε κατάλληλο μέσο, ​​των προϊόντων ενίσχυσης που λαμβάνονται στο (b).

Τα προϊόντα ενίσχυσης (αμπλικόνια) στο (b) είναι 268 bp για το ζεύγος εκκινητών Νο. 1 και 328 bp για το ζεύγος εκκινητών Νο. 2.

Σύμφωνα με μια πλεονεκτική εφαρμογή της εν λόγω μεθόδου, το στάδιο (β) ανίχνευσης εκτελείται με τη βοήθεια τουλάχιστον ενός ανιχνευτή που αντιστοιχεί στις θέσεις 28561 έως 28586, 28588 έως 28608, 28541 έως 28563 και 28565 έως 28589 της αλληλουχίας του πολυνουκλεοτίδιο όπως ορίζεται παραπάνω.

Κατά προτίμηση, το σχετιζόμενο με το SARS γονιδίωμα κοροϊού ανιχνεύεται και προαιρετικά ποσοτικοποιείται με PCR σε πραγματικό χρόνο με τη βοήθεια του ζεύγους εκκινητών Νο. 2 και ανιχνευτών που αντιστοιχούν στις θέσεις 28541 έως 28563 και 28565 έως 28589 επισημασμένες με διαφορετικές ενώσεις, συγκεκριμένα διαφορετικό φθορισμό πράκτορες.

Ο πραγματικός χρόνος RT-PCR που χρησιμοποιεί αυτό το ζεύγος εκκινητών και αυτός ο ανιχνευτής είναι πολύ ευαίσθητος καθώς καθιστά δυνατή την ανίχνευση 10.sup.2 αντιγράφων RNA και έως 10 αντίγραφα RNA. Είναι επιπλέον αξιόπιστο και αναπαραγώγιμο.

Η εφεύρεση περιλαμβάνει τα μονόκλωνα, δίκλωνο και τριπλόκλωνο πολυδεοξυριβονουκλεοτίδια και πολυριβονουκλεοτίδια που αντιστοιχούν στην αλληλουχία του γονιδιώματος του απομονωμένου στελέχους του κοροναϊού και των θραυσμάτων του όπως ορίζεται παραπάνω, και στις νόημα ή αντιπληροφοριακές αλληλουχίες τους, συγκεκριμένα RNA και cDNA που αντιστοιχούν στην αλληλουχία του γονιδιώματος και των θραυσμάτων του όπως ορίζεται παραπάνω.

Η παρούσα εφεύρεση περιλαμβάνει επίσης τα θραύσματα ενίσχυσης που λαμβάνονται με τη βοήθεια εκκινητών ειδικών για το γονιδίωμα του καθαρισμένου ή απομονωμένου στελέχους όπως ορίζεται παραπάνω, συγκεκριμένα με τη βοήθεια εκκινητών ή ζευγών εκκινητών όπως ορίζεται παραπάνω, τα θραύσματα περιορισμού που σχηματίζονται από ή περιλαμβάνουν η αλληλουχία των θραυσμάτων όπως ορίζεται παραπάνω, τα θραύσματα που λαμβάνονται με μεταγραφή in vitro από έναν φορέα που περιέχει την αλληλουχία SEQ ID ΝΟ: 1 ή ένα θραύσμα όπως ορίζεται παραπάνω, και τα θραύσματα που λαμβάνονται με χημική σύνθεση. Παραδείγματα θραυσμάτων περιορισμού συνάγονται από τον χάρτη περιορισμού της αλληλουχίας SEQ ID ΝΟ: 1 που απεικονίζεται από το ΣΧ. 13. Σύμφωνα με την εφεύρεση, τα εν λόγω θραύσματα είναι είτε με τη μορφή απομονωμένων θραυσμάτων είτε με τη μορφή μιγμάτων θραυσμάτων. Η εφεύρεση περιλαμβάνει επίσης θραύσματα τροποποιημένα,

Τα μόρια νουκλεϊκού οξέος σύμφωνα με την εφεύρεση λαμβάνονται με συμβατικές μεθόδους, γνωστές από μόνες τους, ακολουθώντας τυπικά πρωτόκολλα όπως αυτά που περιγράφονται στο Current Protocols ίη Molecular Biology (Frederick M. AUSUBEL, 2000, Wiley and son Inc., Library of Congress, USA ). Για παράδειγμα, μπορούν να ληφθούν με ενίσχυση μιας νουκλεϊνικής αλληλουχίας με PCR ή RT-PCR ή εναλλακτικά με ολική ή μερική χημική σύνθεση.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένα ϋΝΑ ή RNA τσιπ ή φίλτρο, που χαρακτηρίζεται από το ότι περιλαμβάνει τουλάχιστον ένα πολυνουκλεοτίδιο ή ένα από τα θραύσματά του όπως ορίζεται παραπάνω.

Τα ϋΝΑ ή RNA τσιπ ή φίλτρα σύμφωνα με την εφεύρεση παρασκευάζονται με συμβατικές μεθόδους, γνωστές καθ ‘εαυτές, όπως για παράδειγμα χημική ή ηλεκτροχημική μεταμόσχευση ολιγονουκλεοτιδίων σε υάλινο ή νάιλον υποστήριγμα.

Το αντικείμενο της παρούσας εφεύρεσης είναι επίσης ένας ανασυνδυασμένος φορέας κλωνοποίησης και / ή έκφρασης, συγκεκριμένα ένα πλασμίδιο, ένας ιός, ένας ιικός φορέας ή ένας φάγος που περιλαμβάνει ένα θραύσμα νουκλεϊκού οξέος όπως ορίζεται παραπάνω. Κατά προτίμηση, ο εν λόγω ανασυνδυασμένος φορέας είναι ένας φορέας έκφρασης στον οποίο το εν λόγω θραύσμα νουκλεϊκού οξέος τίθεται υπό τον έλεγχο κατάλληλων στοιχείων για ρύθμιση της μεταγραφής και της μετάφρασης. Επιπλέον, ο εν λόγω φορέας μπορεί να περιλαμβάνει αλληλουχίες (ετικέτες) συντηγμένες σε φάση με το άκρο 5 ‘και / ή 3’ του εν λόγω ενθέματος, οι οποίες είναι χρήσιμες για την ακινητοποίηση και / ή ανίχνευση και / ή καθαρισμό της πρωτεΐνης που εκφράζεται από τον εν λόγω φορέα.

Αυτοί οι φορείς κατασκευάζονται και εισάγονται σε κύτταρα ξενιστές με συμβατικές μεθόδους ανασυνδυασμένου DNA και γενετικής μηχανικής που είναι καθ ‘εαυτές γνωστές. Είναι γνωστοί πολυάριθμοι φορείς στους οποίους μπορεί να εισαχθεί ένα μόριο ενδιαφέροντος νουκλεϊκού οξέος για να το εισαγάγει και να το διατηρήσει σε ένα κύτταρο ξενιστή. η επιλογή ενός κατάλληλου φορέα εξαρτάται από τη χρήση που προβλέπεται για αυτόν τον φορέα (για παράδειγμα αναπαραγωγή της αλληλουχίας που μας ενδιαφέρει, έκφραση αυτής της αλληλουχίας, διατήρηση της αλληλουχίας σε εξωχρωμοσωμική μορφή ή εναλλακτικά ενσωμάτωση στο χρωμοσωμικό υλικό του ξενιστή) τη φύση του κυττάρου ξενιστή.

Σύμφωνα με την εφεύρεση, το εν λόγω πλασμίδιο επιλέγεται συγκεκριμένα από τα ακόλουθα πλασμίδια: το πλασμίδιο, που ονομάζεται SARS-S, περιέχεται στο βακτηριακό στέλεχος που κατατέθηκε υπό τον αριθμό Ι-3659, στις 20 Ιουνίου 2003, στο Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15; Περιέχει την ακολουθία cDNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη S του στελέχους SARS-CoV που προέρχεται από το δείγμα που καταγράφηκε με τον αριθμό 031589, όπου η εν λόγω αλληλουχία αντιστοιχεί στα νουκλεοτίδια στις θέσεις 21406 έως 25348 (SEQ ID ΝΟ: 4), με αναφορά στην Genbank ακολουθία AY274119.3, το πλασμίδιο, που ονομάζεται SARS-S1, που περιέχεται στο βακτηριακό στέλεχος που κατατέθηκε με τον αριθμό Ι-3020, στις 12 Μαΐου 2003, στη συλλογή Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15; περιέχει 5 ‘ θραύσμα της αλληλουχίας cDNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη S του στελέχους SARS-CoV που προέρχεται από το δείγμα που καταγράφηκε υπό τον αριθμό 031589, όπως ορίστηκε παραπάνω, το εν λόγω θραύσμα που αντιστοιχεί στα νουκλεοτίδια στις θέσεις 21406 έως 23454 (SEQ ID ΝΟ: 5), με αναφορά στην ακολουθία Genbank AY274119.3 Tor2, το πλασμίδιο, που ονομάζεται SARS-S2, που περιέχεται στο βακτηριακό στέλεχος που κατατέθηκε με τον αριθμό I-3019, στις 12 Μαΐου 2003, στη συλλογή Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15; περιέχει ένα θραύσμα 3 ‘της αλληλουχίας cDNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη S του στελέχους SARS-CoV που προέρχεται από το δείγμα που καταγράφεται με τον αριθμό Νο. 031589, όπως ορίζεται παραπάνω, το εν λόγω θραύσμα που αντιστοιχεί στα νουκλεοτίδια στις θέσεις 23322 έως 25348 (SEQ ID ΝΟ: 6), με αναφορά στην αλληλουχία Genbank με αύξοντα αριθμό AY274119.3, το πλασμίδιο, ονομάζεται SARS-SE, που περιέχεται στο βακτηριακό στέλεχος που κατατέθηκε με τον αριθμό I-3126, στις 13 Νοεμβρίου 2003, στη συλλογή Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15; Περιέχει το cDNA που αντιστοιχεί στην περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF-S και ORF-E και επικαλυπτόμενη ORF-E του στελέχους SARS-CoV που προέρχεται από το δείγμα που καταγράφεται με τον αριθμό 031589, όπως ορίζεται παραπάνω, η εν λόγω περιοχή που αντιστοιχεί στα νουκλεοτίδια στο θέσεις 25110 έως 26244 (SEQ ID ΝΟ: 8), με αναφορά στην αλληλουχία Genbank με αύξοντα αριθμό ΑΥ274119.3, το πλασμίδιο, που ονομάζεται SARS-E, που περιέχεται στο βακτηριακό στέλεχος που κατατέθηκε υπό τον αριθμό Ι-3046, στις 28 Μαΐου , 2003, στη συλλογή Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15; Περιέχει την αλληλουχία cDNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη Ε του στελέχους SARSCoV που προέρχεται από το δείγμα που καταγράφεται με τον αριθμό 031589, όπως ορίζεται παραπάνω, η εν λόγω αλληλουχία που αντιστοιχεί στα νουκλεοτίδια στις θέσεις 26082 έως 26413 (SEQ ID ΝΟ: 15), με αναφορά στο την αλληλουχία Genbank με αύξοντα αριθμό AY274119.3, το πλασμίδιο, που ονομάζεται SARS-M, που περιέχεται στο βακτηριακό στέλεχος που κατατέθηκε υπό τον αριθμό I-3047, στις 28 Μαΐου 2003, στο Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15; Περιέχει την αλληλουχία cDNA που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη Μ του στελέχους SARS-CoV που προέρχεται από το δείγμα που καταγράφεται με τον αριθμό 031589, όπως ορίζεται παραπάνω. η εν λόγω αλληλουχία που αντιστοιχεί στα νουκλεοτίδια στις θέσεις 26330 έως 27098 (SEQ ID ΝΟ: 18), με αναφορά στην αλληλουχία Genbank με αύξοντα αριθμό ΑΥ274119.3, το πλασμίδιο, που ονομάζεται SARS-MN, περιέχεται στη βακτηριακή αλληλουχία που κατατέθηκε με τον αριθμό I-3125, στις 13 Νοεμβρίου 2003, στη συλλογή Nationale de Cultures de Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15 · Περιέχει την αλληλουχία cDNA που αντιστοιχεί στην περιοχή που βρίσκεται μεταξύ ORF-M και ORF-N του στελέχους SARS-CoV.

Έχει και συνέχεια!

Η  ΑΡΧΑΙΑ ΙΘΩΜΗ ΑΠΟ ΤΗΝ ΑΡΧΗ  σας έλεγε ότι είναι κατασκευασμένο βιολογικό όπλο, η πατέντα καταγράφηκε το 2010!!!!!!!!!!

Η έρευνα που έχω κάνει με κόπο κράτησε πάνω από μήνα! Είναι από διάφορες πηγές. Τα στοιχεία είναι τρομερά και δεν μπορούν να τα διαψεύσουν,!!!!

Αντιγράψτε τα για καλό και κακό?